分享一篇近期发表在 RSC Chemical Biology 上的文章：Evaluation of Kdo-8-N3 incorporation into lipopolysaccharides of various Escherichia coli strains，本文的主要内容是作者们利用已有的 LPS 探针，探究了不同标记条件，并评估了其在 16 种大肠杆菌中的标记效果。本文的通讯作者是来自荷兰格罗宁根大学的 Marthe T. C. Walvoort。

细菌的细胞胞膜是革兰氏阴性菌特有的结构屏障，它对细菌自身结构完整性的维持发挥着至关重要的作用。并且，它们也能够帮助细菌抵抗环境中的压力、调节营养物质的摄取和参与宿主与病原菌的相互作用。

脂多糖（LipoPolySaccharides, LPS），它是细菌抵抗环境压力的第一道防线，并维持着细胞胞膜的完整性。LPS 主要由三部分组成，从内到外，分别是（i）Lipid A，具有亲脂性，并镶嵌在细胞膜上；（ii）与 Lipid A 相连的核心多糖，并分为内核心和外核心两部分；（iii）O-抗原，其特点是具有极为多样性的多糖，该部分与核心多糖相连，并且，一直延伸到细菌的表面。不同革兰氏阴性菌的 LPS，其长度和结构都不尽相同，主要归咎于外核心多糖和 O-抗原中碳水化合物的不同。但是，对于绝大多数的革兰氏阴性菌而言，Lipid A 和内核心多糖，相对而言就保守地多。

3-去氧-D-甘露-2-辛酮糖酸（Kdo）是一种细菌特异的，以八个碳原子为骨架的阴离子单糖，它负责连接 Lipid A 和内核心多糖。鉴于其所处 LPS 结构中位置的特殊性以及高度的保守性，Kdo 通常被视为 LPS 形成的标志物。对于绝大部分的革兰氏阴性菌而言，LPS 结构中通常含有两个 Kdo，也发现了仅含有一个 Kdo 的细菌。因此Kdo 很有可能成为新的靶点。

研究人员们因此也开发出了叠氮衍生的 Kdo（即 Ado-8-N3），并且实现了细菌中 LPS 的代谢标记。本文章的核心是研究人员们比较了细菌不同的生长条件（比如 M9 缓冲液和 LB 培养基）对 Ado-8-N3 标记的影响。作者们发现培养条件不同，对于不同的 E. coli 的 LPS 形成影响很大。

作者们也验证了，Click 不同的荧光基团（对比了 FAM、Cy3 和 TAMRA 三种荧光基团）和不同的点击化学类型（张力驱动的和铜离子催化的）对 LPS 标记的影响。作者们发现，只有张力驱动的点击化学才适合该探针对细菌进行成像，TAMRA 荧光基团会杂乱地标记到非 LPS 的物质。

总之，作者们通过对大肠杆菌不同菌株用 Ado-8-N3 探针进行 LPS 的代谢标记，发现标记条件对标记结果的影响很大。因此建议研究人员们从事与 LPS 相关研究的时候，要仔细摸索标记条件。