J. Am. Chem. Soc. | 蛋白质选择性无痕聚糖标记和化学修饰

  • 149
  • A+
分享一篇发表在JACS上的文章，题目为“Traceless Protein-Selective Glycan Labeling and Chemical Modification”，本文通讯作者分别为南京大学化学化工学院的谢然研究员、丁霖教授和山东大学齐鲁医院孟丽莹研究员。

1

在分子水平进行聚糖编辑对阐明聚糖相关生物过程中涉及的复杂机制十分重要，然而对特定蛋白的聚糖修饰进行调控是一项巨大挑战。目前已经发展出了许多方法实现特定蛋白上聚糖修饰的编辑，一种策略是将聚糖加工酶与蛋白质特异性配体偶连在一起，形成配体-糖酶偶联物（L-G），通过配体来靶向POI，然后糖酶进行相应的聚糖编辑。目前基于该策略发展出来的方法都有一定局限性，例如：糖酶的催化活性通常不可调控，会发生脱靶的聚糖编辑，且POI的聚糖编辑程度难以控制；使用的糖酶都较大，可能会干扰POI的正常生理功能。

2

因此本文开发了一种多功能的无痕糖修饰方法。该方法依赖于一个三模块偶联物（L-P-G）的使用，三个模块分别为：①与POI特异性结合的受体；②可光切割的linker；③糖酶，本文使用的是半乳糖氧化酶（Galactose Oxidase, GAO），可以用FeⅡ抑制其活性，用FeⅢ激活其活性。本文主要描述了靶向αvβ3 整合素的RPG（使用的配体是c(RGDfK)）和靶向CD22的SPG（使用的配体是BPCNeuAc）。

0

首先，作者合成并表征了RPG和SPG，确认了RPG和SPG可以按照作者设想的那样通过光照可以释放GAO，之后，用MDA-MB-231细胞证明了RPG可以实现对细胞表面末端Gal/GalNAc的化学修饰。然后，作者将靶蛋白阳性细胞与阴性细胞共培养，再用RPG进行标记，发现RPG可以选择性标记靶蛋白阳性的细胞，之后，作者用ReDiMe的方法检测了RPG的聚糖编辑在蛋白水平的特异性。由于RPG具有两个调控开关，一个是用FeⅡ和FeⅢ来调控GAO的活性，另一个是用光切割linker来控制GAO的释放，所以作者下面利用RPG来研究了整合素的周转。最后作者还发现SPG可以促进CD22二聚。
综上所述，作者开发了一个无痕的蛋白选择性聚糖修饰编辑的方法。

本文作者：LZ

责任编辑：MB

原文链接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/jacs.3c07889

文章引用：DOI：10.1021/jacs.3c07889


weinxin
我的微信
关注我了解更多内容

发表评论

目前评论：