- A+
分享一篇发表在ACS chem bio上的文章,文章题目为“Identification of Low-Density Lipoprotein Receptor-Related Protein 1 as a CXCL14 Receptor Using Chemically Synthesized Tetrafunctional Probes”,本文通讯作者为德岛大学的Akira Otaka和东京医疗科学研究所的Takahiko Hara。
CXCL14是趋化因子CXC家族中的一员,可将CpG寡脱氧核苷酸(ODN)转运到树突状细胞的内体和溶酶体中,从而激活TLR9介导的先天免疫系统。然而目前并不清楚CXCL14介导CpG ODN转运的机制,于是本文作者设计合成了一个化学探针用于寻找CXCL14的互作蛋白。
该探针的设计思路是通过生物偶联反应在CXCL14的C端偶联一个化学分子,该分子包括光交联基团:ACT、可切割的linker(Dde)和用于富集的生物素。首先作者用自己课题组先前发展的NCL反应合成了全长的CXCL14并在其C端的Lys上加了一个Trt保护的Cys,之后脱保护,并通过这个裸露的Cys将ACT-Dde-biotin安装到CXCL14上,从而得到两个探针10和11,二者的区别在于ACT-Dde-biotin与CXCL14之间linker的长度不同。
之后作者用FACS试验证明了这两个探针均可以将CpG ODN与免疫细胞结合,生物活性与天然CXCL14相当。于是,作者进行了定量蛋白质组学试验和竞争性质谱实验,在RAW264.7细胞中鉴定出了一些潜在的CXCL14受体蛋白,最终选择了低密度脂蛋白受体相关蛋白1(LRP1)作为靶点进行验证。
总而言之,本文以CXCL14为基础设计并合成了化学探针用于鉴定CXCL14的互作蛋白。
https://pubs.acs.org/doi/10.1021/acschembio.3c00717

目前评论: