分享一篇发表在JACS上的文章，文章题目为“Reversibly Reactive Affinity Selection−Mass Spectrometry Enables Identification ofCovalent Peptide Binders”，本文通讯作者为MIT的Bradley L.Pentelute教授和Calico Life Science公司的Aaron H. Nile。Pentelute教授的研究方向包括蛋白质与多肽的化学合成、修饰和工程化等。
因为可以靶向蛋白-蛋白相互作用界面，多肽作为小分子药物的替代品越来越受欢迎。为了开发针对目标蛋白质的基于肽的药物，可以基于靶标蛋白的结构进行理性设计或者用噬菌体展示、mRNA展示等技术从文库中筛选。通过这些方法发现的多肽结合剂通常具有微摩尔级的亲和力。以已发现的多肽结合剂为基础，设计合成多肽库，从多肽库中筛选可以有效提高已鉴定肽的亲和力。Pentelute课题组先前开发了一种溶液中亲和力选择-质谱平台可以筛选有中低纳摩尔级亲和力的多肽结合剂。给多肽结合剂添加共价弹头是解决其降解快、循环时间短的有效方法，于是本文作者开发了一个可以从大型合成非经典肽库中筛选多肽结合剂的方法。这个平台的筛选思路为：针对一个单蛋白，在其已知的结合肽的基础上，设计合成一个多肽库，库里的多肽上带有一个巯基乙胺的共价弹头，可以与蛋白的Cys形成二硫键。多肽库与蛋白孵育之后，通过尺寸排阻色谱的方法除掉没有与蛋白结合的多肽，然后用DTT把与蛋白结合的多肽释放下来送入质谱检测，从而找到与蛋白结合的潜在的共价多肽，之后对这些多肽进行改造，将可逆的巯基乙胺弹头换成氯乙酰基或者Dha从而得到最终的共价多肽。文章主要在PV16 E6和Pin1两个蛋白上验证了该平台的可行性。综上所述，本文开发了一个用于筛选共价多肽结合剂的平台。文章链接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/jacs.4c05571原文引用：DOI: 10.1021/jacs.4c05571
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