分享一篇发表在JACS上的文章“E3-Specific Degrader Discovery by Dynamic Tracing of Substrate Receptor Abundance”，通讯作者是来自奥地利科学院分子医学CeMM研究中心的George E. Winter，其主要研究兴趣是癌症中异常基因的调控。

靶向蛋白降解（Targeted protein degradation, TPD）是一种基于小分子降解剂的新型药理学方法，该方法主要通过诱导E3泛素连接酶与目标蛋白接近并将其泛素化从而实现目标蛋白的降解。然而，在人类基因组中编码的大约600个E3基因中，目前只有大约2%可以与小分子降解物（degrader）结合，且主要应用途径都是异质双功能蛋白水解靶向嵌合体（PROTACs），其所用的二价降解剂需要用linker连接E3泛素连接酶配体和靶蛋白的配体。除此之外，近年来研究者也逐渐发现了分子胶降解剂（Molecular glue degraders , MGD），这类降解剂是一价小分子，通过降解剂-蛋白质和蛋白质-蛋白质相互作用稳定连接酶和POI之间的识别表面。该类分子的开发不但可以扩展可成药的蛋白质靶点库，还可以拓宽可E3泛素连接酶的可使用种类。

因此，本文中作者尝试发掘可特异性结合E3泛素连接酶的分子胶降解剂，其方法围绕CRLs展开。Cullin-RING ligases（CRLs）是E3泛素连接酶中的一大家族，通过多个蛋白亚基围绕cullin支架蛋白组装形成，具有高度动态调节特性，其活性的开关调节主要由NEDD8（N8）的沉积和离去决定。N8附着在cullin主链上可以稳定CRL复合物，将其催化能力提高2000倍；相反，COP9信号体（CSN）的de-neddylation作用使NEDD8从cullin主干离去，允许底物受体（SRs）亚基的更换，从而重塑细胞中泛素化蛋白质组。若CSN功能失调与CRL长期结合，将引发“自动降解”机制——其自身的SR将被泛素化。针对该独特的动态调控模式，作者设计了如下的降解剂测定方法：CSN5i-3小分子调节CSN使CRL锁定在自降解状态，加入小分子库后，其中的分子胶降解剂可介导新蛋白底物结合到CRL上，将其SR从原本诱导的自降解中拯救出来，随后通过SR荧光素发光定量的动态“示踪”筛选降解剂。

鉴于目前已有的分子胶降解剂基本都是基于偶然而被发现的，为验证该方法的可行性，本文中作者在用已知的降解剂对连接酶示踪策略进行基准测试后，选择了先前已有分子胶降解剂的CRL4DCAF15体系进行验证。DCAF15可被芳基磺胺类药物靶向，以募集和泛素化剪接因子RBM39，因此作者构建了大量磺胺的化学分子库，阳性对照（indisulam，dCeMM1）的SR水平高度稳定，与此前研究结果一致；此外还发现了新的dRRM-1分子具有与前面二者相似的稳定作用，蛋白质组学实验表明，dRRM-1处理不仅使RBM39降解，而且密切相关的剪接因子RBM23也发生降解。

总的来说，本文作者设计并验证了一种E3特异性蛋白降解剂的表型筛选方法。