为大家分享的是一篇发表在Cell Chemical Biology上的文章，通讯作者是Bio-Rad公司的Francisco Ylera博士。Francisco Ylera博士主要关注抗体的定制化生产和新型制备技术。在本文中，作者通过敲除E.coli周质中的tsp和OmpT酶后成功实现了谍标签融合的抗体Fab段表达，经与谍捕手-Fc段生成异肽键偶联后得到全长抗体，并成功用于酶联免疫吸附，流式细胞术和免疫荧光实验，证明了该方法用于全长抗体生产的普适性。

目前全长抗体的生产仍然费时费力，在本文中，作者希望在E.coli中通过谍标签-谍捕手的异肽键偶联机制，方便的拼接得到全长抗体。然而在实验中作者发现，通过E.coli表达Fab-FLAG tag-SpyTag-His tag融合蛋白后，无法通过镍柱纯化得到抗体Fab段。

通过分析，作者认为这是由于E.coli周质中的tsp和OmpT酶会对谍标签上的特定肽段序列进行切割（图D橙色VM/紫色KR），同时使His tag脱离Fab，导致最终无法纯化得到Fab抗体。在敲除tsp和OmpT后，作者成功实现了谍标签融合的Fab抗体的制备，并在1281种Fab抗体中进行了产率验证。

在得到谍标签标记的Fab抗体后，作者进一步将谍捕手融合的Fc段与其进行偶联得到全长的拼接抗体，并提出了多种拼接形式。作者发现当需要偶联多个谍标签-谍捕手来构建更加复杂的拼接抗体时，反应速率大幅降低，这可能是作者最终没有使用复杂拼接抗体的原因。

最后，作者将拼接抗体分别用于酶联免疫吸附，流式细胞术，免疫荧光成像的实验，均得到较好结果，在对于HER2的亲和力验证中，该方法制备的拼接抗体亲和力高于商业化的曲妥珠单抗。

综上，作者实现了在E.coli周质中表达谍标签融合的抗体Fab段，进而与谍捕手偶联得到了全长的拼接抗体，并应用于一些生物实验中，验证了该方法的普适性。

文章作者：MY

原文链接：https://doi.org/10.1016/j.chembiol.2021.01.011