分享一篇来自ACS Chemical Biology的文章“Cellular Labeling of Phosphatidylserine Using Clickable Serine Probes”。

磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine, PS)是一种重要的生物标志物，其作为许多蛋白质的配体，通过非共价蛋白-脂质结合相互作用驱动它们的膜结合。尽管PS等脂类具有重要意义，但由于脂类生物合成途径的复杂性，在体内追踪脂类分子的生物合成和运输较为困难。为此作者基于生物正交策略，使用一系列可点击的丝氨酸类似物对PS进行标记，使其可以通过LC-MS、荧光成像、薄层色谱等方法，实现对PS的追踪和定位。

SPAAC对探针-细胞的共孵育物进行click标记，然后在共聚焦显微镜下观察，发现N-L-SerN3和C-L-SerN3显示出强荧光且共定位实验显示，N-L-SerN3和C-L-SerN3标记在细胞膜上，而对照组N-D-SerN3和C-D-SerN3几乎不显示出荧光。该结果证明改探针具有细胞膜立体选择性。

除此之外，作者还观察到C-L-SerN3在出芽细胞上的标记效果增强了。

为了探究丝氨酸探针是否与PS生物合成机制相互作用，作者评估了其对白念珠菌中PS合成酶Cho1p活性的影响。3H标记丝氨酸后，使用细胞膜上提取的cho1p酶进行催化合成PS，结果显示3H转化丝氨酸为PS的过程被丝氨酸探针以时间-浓度正相关的方式抑制了，这些探针与Cho1p相互作用使 3H -丝氨酸向3H-PS的转化受到竞争或阻断。作者还使用LC-MS对标记的酵母细胞裂解物进行分析，发现脂质产物PS、PE、PC均含有N-L-SerN3标记，这证明了探针参与PS合成。

最后作者还使用TLC检测探针参与PS合成的过程。收集指数增长期被N-L-SerN3标记后的细胞，然后使用CuAAC将探针标记并与未进行click反应的组进行对照。结果显示在4*泳道显示出新的荧光带，对比对照该条带为PE。