分享一篇发表在JACS的文章：“Two Birds One Stone” Strategy for the Site-Specific Analysis of Core Fucosylation and O-GlcNAcylation，文章的通讯作者是中科院上海药物研究所的周虎教授和文留青教授，前者主要研究方向是基于质谱的药物蛋白质组学，后者主要研究方向是糖化学生物学和糖类药物。
核心岩藻糖修饰和O-GlcNAc糖基化修饰是蛋白质糖基化修饰中非常著名的两种修饰，具有非常重要的生物学功能，这里作者就计划对这两种修饰进行位点特异性的鉴定和分析。作者使用了之前他们课题组2022年发表在Angew上的一种N糖类似物探针（Angew. Chem., Int. Ed. 2022, 61, e202206802），其带有叠氮基团，并且该探针可以在特定的内切酶的帮助下与核心岩藻糖等单糖连接。在这里作者筛选并得到了两种可以辅助探针与核心岩藻糖以及O-GlcNAc修饰连接的突变的糖苷内切酶。随后作者使用的富集聚合物是一种带有环张力炔基的N-异丙基丙烯酰胺，其具有温度敏感的特性，可以在温度降低时沉淀从而将通过click连接了探针的糖肽富集下来，最后通过野生型的糖苷内切酶释放原有的核心岩藻糖糖肽和O-GlcNAc糖肽，通过质谱对两种修饰进行鉴定，从而实现一次实验鉴定两种修饰的“一石二鸟”的策略。
作者通过筛选确定了糖苷内切酶突变体EndoCC-N180H可以帮助N糖类似物探针Probe1与O-GlcNAc修饰特异性连接，而突变体EndoF3-D165A则可以帮助其与核心岩藻糖修饰特异性连接，随后作者也讨论了使用N-异丙基丙烯酰胺聚合物相比于常规链霉亲和素的优势，即前者更便宜，并且通过实验证明了前者也可以用于Click随后富集糖肽。
在确定了此方法的可行性之后作者就使用此方法对HepG2细胞系，MCF7细胞系以及HeLa细胞系中的O-GlcNAc糖基化和核心岩藻糖修饰进行全局性鉴定，得到了一系列数据，也绘制了具有O-GlcNAc糖基化和核心岩藻糖修饰的蛋白的相互作用网络。
总之作者开发了一种可以单次实验同时鉴定两种蛋白糖基化修饰的方法，为后续的研究提供了有力的工具。原文链接：https://pubs.acs.org/doi/10.1021/jacs.3c02976文章引用：DOI: 10.1021/jacs.3c02976
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